Vevsplasminogenaktivator eller TPA er en type serinprotease, som er i stand til å ødelegge protein blodpropper. TPA er funnet i cellene som innvendig dekker blodkarene. TPA-protokoller er en del av den farmasøytiske og medisinske forskning på slag, så vel som hjerte og lunge-sykdommer, slik som lungeemboli og myokardialt infarkt. TPA rensing refererer til isolering av dette protein fra andre molekyler gjennom en rekke prosesser, inkludert kromatografi og elektroforese.

Rensing av TPA fra Hog Nyre

Denne protokollen blir brukt i studier av fibrinolyse, prosessen med å bryte av produktet fra koagulering kalt fibrin, relatert til dannelsen av tumorer. Teknikere ekstrakt TPA fra aceton-tørket hog nyre med kalium-acetatbuffer ved pH 4,2. Deretter legger de ammoniumsulfat å indusere celle nedbør. De legger n-butyl-sefarose til prøvene, som deretter analysert på en chromatographer. Concanavalin A blir også tilsatt, og chromatograph.y for å separere forskjellige proteiner blir utført.

Rensing av TPA fra kinesiske hamstere og E. coli-celler

Protein renhet er en viktig faktor i suksessen til biologiske eksperimenter. Renset TPA er også kommersielt tilgjengelig, og dermed spare tid og unngå risikoen for å risikere eksperimentet på grunn av dårlig rensede oppløsning. Denne protokollen innbefatter renseprosessene av TPA i pattedyr og bakterieceller. Teknikere utløse celleprøver, filtrere dem og utføre affinitet og gel kromatografi analyse. Senere, de analyserer og sammenligner resultatene, før kommersiell produksjon.

Ekspresjon av aktivt humant tPA i E. coli

Avklares cellelysater blir tilsatt til en lysin - Sepharose-kolonne, analysert i et chromatographer og vasket med en oppløsning av natrium klor. En annen prøve blir applisert på en kromatografikolonne inneholdende andre proteiner som bindes til TPA med en svært høy affinitet. En prøve fra den andre kolonnen er blandet med en oppløsning av sink-sepharose. Det resulterende protein viser mer enn 90 prosent renhet, i henhold til tidsskriftet "Applied and Environmental Microbiology".