Digidexo.com

DNA Extraction Prosedyrer

DNA er oppskriften for livet; innenfor sine milliarder av koder legge grunnlaget for organismer. Studier og analyser av DNA - i alt fra slektsforskning til kriminelle etterforskninger - har blitt svært vanlig. Å undersøke DNA, men det må først tas ut fra en prøve. Enten det er en hårlokk eller en bit av blod, kan DNA finnes i nesten alt som utgjør en organisme og dens utvinning prosedyrer har blitt perfeksjonert over flere tiår.

Cellelysis

Lyse er handlingen der cellene er bokstavelig talt ødelagt, forårsaker innholdet å søle ut for analyse. De celler som inneholder DNA-prøven som skal ekstraheres må åpnes, og dermed tillater oss å få tilgang til lysatet, eller fluidet på innsiden. Dette oppnås ved hjelp av flere metoder, den mest vanlige av disse er sonikering. Sonicating er den prosessen som kondenseres lyden tilføres til cellene, og dermed å røre dem og bryte deres intermolekylære reaksjoner. Andre metoder for å indusere lyse inkluderer innføre et virus, som bryter den åpen fra innsiden; enzymer som spiser bort på overflaten; og osmose, som innebærer å plassere cellene i vann, slik at fluidet på innsiden av dem å gjøre sin bort til utsiden, hvor den kan trekkes ut.

Membran Removal

Deretter må lipidene rundt cellens membran fjernes. Lipider er typer fett, voks, monoglycerider, fosfolipider og andre naturlig forekommende molekylære stoffer som brukes som strukturelle komponenter til cellemembraner, noe som gir dem en viss stivhet. Disse blir fjernet ved vasking av cellene 'lysat i en vaskemiddeloppløsning, vanligvis en form for kromsyre.

Protein Fjerning

Etter lipidene er fjernet fra lysatet, er det nå viktig å fjerne eventuelle gjenværende proteiner. Dette oppnås gjennom tilførsel av det som kalles en protease. En protease er et enzym som spesielt er utformet for å bryte ned de angitte proteiner. Denne handlingen kalles proteolyse, mens protease forårsaker hydrolyse (bryte ned) av de båndene som holder aminosyrer sammen. Aminosyrer utgjør proteiner, og uten deres konfigurasjon, bryter ned proteiner.

Utløsende

Det er endelig tid for å vise den rene DNA. Dette kan gjøres ved å dyppe lysatet i iskald alkohol, vanligvis etanol. Siden DNA er uoppløselig i alkohol, det vil klumpe seg sammen. Når blandingen er omrørt med en metallskje, vil DNA synlig vikle rundt metallet, likner hvit bomull. Dette er kjent som utfelling, med DNA kjent som DNA-bunnfall.

Isopropanol

Sammen med etanol, isopropanol også brukes noen ganger gjør trekke ut DNA bunnfall. På den positive siden, er det mer effektivt enn etanol, hvilket gav en høyere konsentrasjon av DNA ved bruk. Men det er også langt mindre flyktig og krever mer tid for å tørke. Det kan også bemerkes at DNA ikke kan følge så vel på skjeen eller et rør ved bruk av isopropanol.