Hvordan måle Protein Expression
Protein uttrykk tiltaket kan gi hint om aktivitetene til genene i kroppen din, fordi proteinene fungerer som den endelige katalysator av celleaktiviteter. Men ifølge en artikkel i mars 2010-utgaven av "LabMedicine", patologer og biologer er ennå å bli enige om lysfelt mikroskopi eller fluorescens mikroskopi som den mest egnede metoden for å måle protein uttrykk. Hel-lysbilde lysfelt skanning er ikke bare lett å bruke og gir kromogenløsning stabilitet, men det kan beskytte glassplater lenger.
Bruksanvisning
• Plasser cellevevet på et objektglass og tilsett en biotinylert sekundært antistoff, etterfulgt av streptavidin-pepperrot peroksydase og vente på to minutter.
Hell fire dråper av 3,3'-diaminobenzidin på prøven og vente i to minutter for den brune flekken for å spre helt på prøven.
Plasser en histologisk seksjon av de fargede prøven på en motorisert plattform i et godt opplyst rom. Justere nøye Color Line-scan kamera til 20X eller 40X forstørrelse og skanne prøven. Rett inn striper i bildet og komprimere digitale bildet inn i en lesbar fil størrelse.
Skriv det digitale bildet for manuell analyse eller mate bildet inn i dataprogrammer for teknologistøttet analyse. Observere mønsteret av flekker som presenteres i bildet. Analysere nøye protein uttrykk basert på mønstre av flekker på prøven.
Evaluer protein ekspresjon på kreftceller og stroma ved å undersøke konsentrasjonen av proteinet som blir uttrykt på cellevevet.
Bruk fargemønstre for å kvantifisere protein uttrykk i en skala fra 0 til 3+. Bruk score for å beregne HER-poengsum eller Allred poengsum.
Tips og advarsler
- En brun utfelling indikerer et bestemt protein av interesse, mens en mørk brun flekk indikerer tilstedeværelse av flere proteiner.
- Proteinekspresjon oppstår enten på kjernen eller på cytoplasma.
- Celler uten membran flekker tiltak null; de med tett membran flekker tiltaket 3+.
- Cellemembranen har HER-2 poeng.
- HER-poeng angir hvor en kreftpasient ville reagere på behandling.
- Korrelasjonen mellom proteinet og signalet er ikke-lineær.