Digidexo.com

Western Blot påvisningsmetoder

Western Blot påvisningsmetoder


Ettersom antallet HIV og AIDS-tilfeller steg over hele verden, behovet for nøyaktig HIV-testing ble avgjørende. Nå etter positive ELISA HIV-tester, medisinske fagfolk bruker en Western blot test for å bekrefte en positiv HIV-infeksjon. Leger diagnostisere borreliose gjennom Western blot testing også. Testen benytter intrikate påvisningsmetoder: helsearbeidere må overføre blodprøver fra en gel til en membran for å forenkle deteksjonsprosessen. Å faktisk identifisere antistoffer i membranen, arbeidere bruke spesifikke enzymer, underlag og / eller flurophores.

AP Enzyme

Alkalisk fosfatase (AP) utgjør en av de viktigste enzymer i Western blot testing. AP har en lineær reaksjonstid, noe som gir det en deteksjon fordel fremfor andre enzymer. Jo lengre tid en AP reaksjonen har til å forekomme, desto mer nøyaktig test. Imidlertid kan det i lengre tid hente andre kjemiske forbindelser og "bakgrunn" støy, som kan forskyve resultatene av testen.

HRP Enzyme

Helsearbeidere anser pepperrot peroksidase (HRP) overlegen til AP, på grunn av HRP mindre størrelse, høy aktivitet hastighet, kompatibilitet med reaksjonen membran, pålitelighet, billig pris og utbredt tilgjengelighet.

Kromogeniske Underlag

Medisinsk fagpersonell vurdere kromogene substrater beste for visning av den indre-membran reaksjon av blod og enzym. Kromogene substrater er ikke så sensitiv som andre substrater og har en tendens til å forsvinne som blot tørker. Men for en rask visuell test bekreftelse, kromogene substrater gjøre en effektiv valg.

Kjemiluminescente Blotting Underlag

Kjemiluminescerende blotting substrater krever en konstant reaksjons for en vellykket test. Hvis enzymaktiviteten opphører eller substratet er oppbrukt, blir testresultat tapt. Imidlertid, i en optimal test, blir testresultat tilgjengelig i en til 24 timer. Helsearbeidere bruker digital imaging utstyr eller røntgen for å faktisk se testresultatet, fordi det blotte øyet ikke kan oppdage det.

Flurophores

Hvis helsearbeidere ikke teste med enzymer og deres respektive underlag, da de benytter flurophore-konjugerte antistoffer. Den flurophore test krever færre trinn, men trenger spesialutstyr. Testen krever en eksitasjons-lyskilde, som bevirker den riktige reaksjonen i membranen. Flurophores og belysningsutstyr er dyrt, men helsearbeidere har fordelen av å bruke flere flurophores i samme eksperiment.