Antistoff merkingsprosedyrer er teknikker som benyttes i de biologiske vitenskaper å påvise nærvær av spesifikke molekyler. Disse fremgangsmåter gjør bruk av forholdet mellom et antigen og antistoff. Antigener kan være ethvert molekyl som immunsystemet gjenkjenner. Et antistoff er et Y-formet protein som spesifikt gjenkjenner et enkelt antigen. Biologer bruke bindingen forholdet mellom et antistoff og antigen for å bestemme plasseringen av et bestemt molekyl i en prøve.

ELISA

ELISA, eller enzym-linked immunosorbent assay er et biologisk laboratorieteknikk som brukes til å detektere nærværet av et antigen eller antistoff. Det er ofte brukt i medisinsk diagnose for å bestemme hvorvidt en pasient har blitt eksponert til en spesiell type infeksjon.

Å utføre en ELISA, prøven & mdash; inneholder antigen av interesse & mdash; er forankret til en solid støtte i en skål. En løsning med den komplementære antistoff tilsettes til fatet, og antistoffet binder til antigenet. Skytende antistoff blir deretter vasket bort, slik at bare antigen-antistoff-bundet par i retten. Dette kan visualiseres ved tilsetning av et fluorescerende molekyl som binder seg til antistoffet, og avgir et visuelt signal, som så kan kvantifiseres. På denne måte kan tilstedeværelsen og mengden av antigenet av interesse kan bestemmes indirekte.

Western Blot

Et Western blot er en annen type teknikk som brukes for å påvise et spesifikt protein i en prøve og bestemme dets størrelse. Først blir prøveproteiner spredt ut etter størrelse på en gel ved hjelp av gelelektroforese. På dette punktet, proteiner ikke er synlige for det blotte øye. Forskere deretter overføre proteinene til en membran og tilsett en løsning inneholdende antistoff til antigenet av interesse. Etter å ha vasket bort overskytende oppløsning, blir antistoff bundet til antigenet på membranen.

Tilsetning av et sekundært antistoff som forårsaker den opprinnelige eller primære, antistoff for å sende ut lys. Kvantifisering av mengden av lys som emitteres tillater forskere for å bestemme tilstedeværelsen av antigenet, dets størrelse i forhold til andre proteiner og dens relative konsentrasjon.

Immunhistokjemi

Immunhistokjemi er en teknikk som gjør det mulig for forskere å visualisere plasseringen av et protein i en vevsprøve. Små stykker av en prøve fremstilles og et primært antistoff, som er festet til antigenet av interesse, tilsettes. Overskytende oppløsning vaskes bort før forskere legge et sekundært antistoff. Dette antistoffet er festet til det primære antistoff-antigen-par og sender ut lys, signale plasseringen av antigenet av interesse.

Forskere bruke et mikroskop for å visualisere hvor antigenet er i cellen. Flere forskjellige antistoffer, som hver er spesifikke for et bestemt protein, kan anvendes for å bestemme den relative plassering av flere molekyler i en celle. Hvis dette er målet, er forskjellige fargede sekundære antistoffer brukes til å skille mellom de ulike molekyler av interesse.

Flowcytometrisystemer

Fluorescens-aktivert cellesortering & ndash; eller FACS & ndash; er en type flowcytometri brukes til å skille mellom forskjellige typer av celler i en løsning. Hver annen celletype er "merket" med et antistoff spesifikt for den celletype. Hvert av disse antistoffer avgir en annen farge av lys. En maskin agiterer oppløsningen for å bryte det opp i individuelle dråper, og bruker en sensor for å detektere farge av hver dråpe. Maskinen sorterer cellene ved emittert farge, dele dem basert på typen av protein de inneholder. FACS metodikken gir forskere til å sortere og kvantifisere celler av interesse for sine forskningsspørsmål.

Immuno-elektronmikroskopi

Normal elektronmikroskopi tillater forskere å undersøke strukturen av et celleforstørres opp til 1 million ganger. Immuno-elektronmikroskopi benytter egenskapene til antistoff-antigen-binding for å visualisere bestemte proteiner i meget tynne vevssnitt. Først blir antistoffer med festet gullpartikler tillates å binde seg til antigenet av interesse. Et elektronmikroskop og visualiserer gullpartiklene, noe som gir forskerne et bilde av hvor er lokalisert proteinet i cellen.

Selv om immunelektronmikroskopi er enkelt i teorien, er det teknisk vanskelig og veldig dyrt å ansette, begrense sin popularitet for bruk i mange biologiske forskningsprogrammer.