An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) innbefatter omsetning av et antistoff-enzym-kompleks med et antigen eller antistoff holdt immobil på en fast overflate. Ved inkubering av den konjugerte enzym med et egnet substrat, er et produkt dannet. Dannelsen av et produkt som bidrar til å påvise tilstedeværelse av antigenet eller antistoffet, og dens kvantitet gir et mål for mengden av antigen-antistoff-reaksjon som fant sted. ELISA-test kan utføres på to måter: direkte og indirekte.

Test Format

I den direkte ELISA-test, er en primær antistoff holdt på veggene av en mikrotiter-plate. Når prøven mistenkes for å inneholde antigenet blir tilsatt, er det en antigen-antistoff reaksjon. Neste, et enzym-bundet sekundært antistoff som er i stand til å reagere med antigenet blir tilsatt. Hvis antigenet er tilstede i prøven, bindes det til denne enzymkoblet antistoff. Når et farveløst substrat tilsettes, dersom en farge utvikler seg, indikerer dette nærvær av antigen. I den indirekte ELISA, blir antigenet holdes på veggene av mikrotiter-platen. Når en prøve mistenkt for å inneholde antistoffer som er lagt til, oppstår det en antigen-antistoff reaksjon. Deretter blir en enzym-bundet sekundært antistoff i stand til reaksjon med det ubundne regionen av antistoffet tilsettes. Når fargeløst substrat tilsettes, det fører til utvikling av farge hvis prøven inneholder antistoffer brukt.

Brukervennlighet Testing

Et bredt spekter av merkede sekundære antistoffer er kommersielt tilgjengelige. Dessuten er det mulig å lage flere primære antistoffer i en gitt art og bruke samme sekundært antistoff for påvisning. Dette gjør den indirekte ELISA lett å utføre. I den direkte ELISA, de primære antistoffene har til å være spesielt forberedt til å reagere med det spesifikke antigenet som mistenkes å være tilstede i prøven. Dette gjør den direkte ELISA ufordelaktig sammenlignet med den indirekte test.

Hurtighet Testing

Den direkte ELISA-testen er rask i forhold til den indirekte test fordi den bare bruker en enkelt antistoff. Den indirekte ELISA krever et ekstra trinn med inkubering med et andre antistoff i løpet av testprosedyren, noe som fører til en forsinkelse i å oppnå resultater.

Følsomhet

Den direkte ELISA-testen er mindre følsom enn den indirekte form av testen fordi det er mye mindre signalforsterkning. Dessuten kan merking av det primære antistoff med et enzym svekke dens immonoreactivity profil. I tilfelle av indirekte ELISA, er det primære antistoff ikke er merket, og derfor beholder sin immunoreaktivitet. Dessuten har hver primære antistoff flere epitoper som kan binde med det sekundære antistoff; Dette tillater forsterkning av signalet, å forbedre metodens følsomhet. Imidlertid er det en sjanse for kryssreaktivitet mellom antigen og det sekundære antistoff, fører til en feil i resultatene. Det er ingen slik mulighet i den direkte ELISA metoden.