Kryopreserveres perifere mononukleære blodceller (PBMC) er en hyppig kilde til prøver for forskning som inkluderer immunterapi og svar på vaksiner. Mens noen protokoller er begrenset til isolering og fryse faser av prosessen, mens andre omfatter tining prosedyrer.

Isolasjon prosedyre og Fryse Prosedyre

En kommersiell forbindelse for å fremme separasjon er plassert i hver 50 ml sentrifuge-rør, og rørene sentrifugert i tretti sekunder. Caps av reagensrør er sprayet med alkohol før åpning, deretter antikoagulant-behandlet helt blod blir så overført via pipette inn i sentrifugerør. Plasma sjikt av blodet blir sugd opp med en pipette.

Frysing

Cellene fra det foregående trinnet blir deretter sentrifugert med saltvann tre ganger. Etter en celletall, vil prøvene sentrifugeres deretter suspendert i iskaldt medium. Prøvene i frysemedium er neste delt mellom cryovials i en ml mengder. Ampuller er lagret over natten i et
-70ºC Fryser og flyttet til langtidslagring i flytende nitrogen neste dag.

Sikker Tining

Cryovials overføres fra flytende nitrogen i et 37 ° C vannbad, og prøven tillates å tine ett til to minutter. En varm transport media legges til hvert hetteglass. Fortynnet cellesuspensjon sentrifugeres i syv minutter. Antallet og celle levedyktighet blir kontrollert, hvis cellene trenger å konsentrere seg, er prøvene sentrifugeres syv minutter til. Prøven fortynnes til arbeidsløsning og hvilte for 12-18 timer før du begynner eksamen i den angitte protokollen.