Tetramethylrhodamine etyl (TMRE) er en "langsom, lipofile, kationiske fluorescerende reditribution fargestoff" brukt i MitoPT ™ TMRE / TMRM mitokondriemembranen Potential Assessment Kit, produsert av Immunochemistry Technologies, LLC. Prosessen bidrar til å vise en transmembrane elektrisk potensial gradient i celler.

Klar analysen

Protokollen er lett å følge, og tar omtrent 20 minutter å behandle ved 37 grader Celsius. De levende celler som brukes i analysen, kan ta mellom flere timer og flere dager for å klargjøre for bruk. De kontrollceller kan ta flere timer for å forberede, som de trenger for å bli indusert til å gjennomgå apoptose.

Protokoll del 1

Kultur cellene til en tetthet optimal for apoptose eller oksidativt stress induksjon, i henhold til dine spesifikke induksjon protokollen, men ikke å overstige 10 (6) celler / ml.

Protokoll del 2

På samme tid, kulturen en ikke-induserte negative kontrollcellepopulasjon (med samme tetthet som den induserte populasjon.

Protokoll Del 3

Indusere apoptose eller med hensikt depolarize mitokondriene etter ditt ønskede protokollen.

Protokoll Del 4

Forbered 1X analysen / vaskebuffer.

Protokoll Deler 5 til 8

Klargjør en mm eller 0,2 mM MitoPT ™ TMRE / TMRM lager. For Protocol Del 6, utarbeide en 1: 100 fortynning av 1 mm, eller en 1:20 fortynning av 0,2 mM MitoPT ™ TMRE / TMRM løsning for spiking inn prøver cellekultur.

For protokoll del 7, beis celler ved hjelp av en endelig 20-200 nM konsentrasjon av MitoPT ™ TMRE / TMRM løsning.

For protokoll Del 8, analysere dataene.