Digidexo.com

Co-Immunpresipitasjon Protocol

Co-Immunpresipitasjon Protocol


Co-immunoprecipitation protokollen (Co-IP) er en mye brukt fremgangsmåte for å analysere protein interaksjon. Fremgangsmåten består generelt av tre trinn. Et antistoff blir introdusert til et cellelysat, er antistoff-protein-komplekset er kjemisk bundet, og proteinet er identifisert ved analyse.

Co-Immunpresipitasjon Oppsummering

Co-IP består av en rekke trinn for å sikre nøyaktige testresultater. Det første trinn krever et antistoff spesifikt for proteinet som skal tilsettes. I det andre trinnet, er protein-G eller protein-A sepharose brukes til å binde antistoff-protein-komplekset. Endelig sekvense et renset proteinbånd, eller Western blot-analyse, blir brukt til å identifisere den ko-utfelt protein.

Generelle Steps

Protokollen kan deles inn i tre generelle trinn på sikt av mekanikken i prosessen. Det første trinnet er arbeidsflyt for å fullføre prosedyren i minst mulig tid. Det andre trinnet er generelle betraktninger for prosedyren. Det siste trinnet er feilsøking.

Spesifikke trinn

Arbeidet strømmen begynner med fremstilling av kulturen for blotting-analyse, og avsluttes med bestemmelse av nærværet av noen proteiner. Generelle betraktninger består av nøkkeltrinnene som for eksempel pre-rensing, er valget av buffere og valg av Protein A eller Protein G Resin. Feilsøker omhandler slike spørsmål ingen påvisning av protein, binding av antistoffer til proteinene, antistoff-fragmenter og muligheten for en mislykket Co-IP.