Enzymet NADPH oksidase er identifisert som en produsent av reaktive oksygenarter under prosesser, inkludert vekst av vaskulære glatte muskelceller. Disse reaktive arter som er knyttet til en rekke sykdommer innbefattende hypertensjon, diabetes, kreft og inflammasjon; fremgangsmåter for overvåkning av aktiviteten til dette enzymet er kritisk for utvikling av mulig behandling.

NADPH oksidase

NADPH oksidase tilhører en familie av enzymer som hjelper med elektron overføring mellom NADPH og oksygen. Imidlertid har NADPH oksidase den unike evne til å produsere reaktive oksygenforbindelser fra denne reaksjonen, sammenlignet med andre familiemedlemmer, hvor reaktive oksygenforbindelser genereres på andre måter. Et multimert proteinkompleks, består NADPH oksidase av den membran-bundet flavocytochrome b558, som brukes som en målemarkør.

Reaktive oksygen arter (ROS) Generation

Som sjef kilde til ROS, spesielt hydrogen peroxide, produserer NADPH oksidase liten, men stabil mengder via sin isoform uttrykt i blodkar, som er involvert i signale prosesser. Denne konsistent produksjonen kan til slutt overvelde naturlig antioksidant system, forårsaker et tap av beskyttende forbindelser, for eksempel nitrogenoksyd, og generering av enda kraftigere ROS.

Chemiluminescence Method

Chemiluminescence muliggjør meget følsom og automatisert måling av NADPH oksidase aktivitet over et område av konsentrasjoner. I løpet av denne fremgangsmåten blir substratet NADPH tilsatt til en vevsprøve inneholdende NADPH oksidase. Ved reaksjon, er ROS generert og reagerer med forbindelsen lucigenin å produsere en chemilluminescent effekt, som blir målt. Luminescence er direkte proporsjonal med NADPH oksidase aktivitet, som enzym bestemmer reaksjonshastigheten.

Kinetic analysen via flowcytometrisystemer

I denne metoden, blir vevsprøver analysert via strømningscytometri. Benmarg er adskilt fra prøven ved hjelp av Hanks 'Balanced Salt Solution. Spesifikke flekker og detektere antistoffer tilsettes til prøven i polystyren-reagensrør. Prøven blir deretter inkubert, vasket med Hanks 'Balanced Salt Solution, merket med molekylære prober og fremstilt fra strømningscytometri. Kontroll rør er også gjort for sammenligning og for å kalibrere strømningscytometer. Maskinen blir deretter fors og målinger registrert.