Digidexo.com

Biotinylering Protokoller

Biotinylering er prosessen med å koble biotin, eller vitamin H, til et protein eller andre molekyler. Denne vitenskapelige prosedyren er mest brukt i bioteknologi og molekylærbiologi forskning som involverer DNA, proteiner og antigener, som er molekyler kroppens immunsystem gjenkjenner som inntrengere. Biotinylering protokoller inkluderer biotinylering av antistoffer og peptider, samt celleoverflaten biotinylering.

Biotinylering av Antistoffer

For å koble biotin til antistoffer produsere proteiner når et antigen kommer inn i kroppen, teknikere med natriumbikarbonat (NaHC03) ved pH 9; dimetylsulfoksid (DMSO);

NHS-Biotin og en saltvann stoff kalt PBS. Prøver ble blandet med natrium-bikarbonat, som senere tilsettes til NHS-biotin i DMSO. Løsningen blir så tilsatt til de analyserte antistoffer og inkubert på en del av utstyret som kalles en rotator i fire timer ved romtemperatur eller over natten ved 39,2 grader Fahrenheit. Til slutt blir oppløsningen fortynnet med PBS.

Celleoverflaten Biotinvlerina

På celleoverflaten biotinylering protokollen, teknikere bruke vevskultur, fosfat-bufret saltløsning (PBS) ved pH 7,4 og sulfosuccinimidyl-2-(biotinamido)-etyl-1,3-ditiopropionat bufferoppløsning for å balansere surhet som inneholder aminogrupper og TrisCl ifølge Omløps Protocols i Protein Science.The celler blir blandet med biotin og bufferoppløsningen, dekantert og sentrifugert. Solid innhold og spesifikke proteiner er senere analysert på en gel elektroforese plate.

Biotinylering av peptider

Å utføre biotinylering av peptider, reagensen brukes er NHS-SS Biotin, ifølge Philip Shepherd i "monoklonale antistoffer: en praktisk tilnærming." Peptider er korte fragmenter av aminosyrer, de molekyler som danner proteiner og DNA. I denne protokollen, er den kommersielle løsning NHS-SS Biotin oppløst i vann. Deretter peptid prøve ble tilsatt til den, sammen med natrium-bikarbonat for å balansere surhetsgrad eller pH. Oppløsningen ble deretter incubert på is i to timer. Teknikere kan observere prøven, med eller uten de biotinmolekyler.