Digidexo.com

Formålet med Protein Expression Analysis

Formålet med Protein Expression Analysis


Studiet av proteiner er en viktig prosedyre i biologi, utført i både diagnostikk og forskningslaboratorier i akademia og industri. Diagnostisk proteinekspresjon analyse anvendes for å påvise tilstedeværelse av sykdommer eller unormale fysiologiske betingelser. I forskning er det brukt i produksjon av bio-konstruert proteiner for videre vitenskapelig studie eller i legemiddelutvikling.

Protein Expression

Ekspresjon av proteiner er svært enkelt produksjon av et protein fra en definert aminosyresekvens, som igjen er bestemt av en definert gensekvens. Forstå disse sekvensene gjør en etterforsker til å endre et protein på ulike måter - for eksempel ved å plassere et fluorescerende tag på protein, så det kan bli oppdaget, eller ved å fjerne deler av protein som kan forstyrre med sin produksjon eller foredling av en celle .

Metoder og verktøy for analyse av Protein Expression

Proteinekspresjon blir analysert ved hjelp av meget avanserte og spesialisert teknologi og prosedyrer, slik som ELISA, Immunoassays, massespektrometri, og avbildning. I de fleste tilfeller proteinet detekteres indirekte - for eksempel ved å bruke et antistoff som binder seg til det, og deretter ved hjelp av en sekundær deteksjonssystem for å visualisere det. En grunnleggende protein deteksjonsteknikk er det av Western blotting, hvor et protein kjøres gjennom en agarosegel og deretter overført til en membran. Det er da "probet" ved å tillate et antistoff til å binde seg til det, og antistoffet blir deretter omsatt med en kjemisk oppløsning, slik som en sølvfarge, for å produsere et bilde av proteinet plassering på blot. Dette gir en indikasjon på størrelsen av proteinet, og om det er til stede som eller flere enkle enheter. En annen vanlig brukt metode er fluorescerende påvisning. Binding av et antistoff merket med et fluoriserende partikkel til proteinet vil tillate det å bli visualisert ved mikroskopi.

Hensikten med å analysere Protein Expression

Studere uttrykket av et protein gir en etterforsker en indikasjon på hvor det blir produsert (dvs. dens uttrykk mønster og lokalisering) eller dets mengder (dvs. dens vev eller cellulære nivåer). Denne informasjonen brukes i diagnostisk patologi, for eksempel, til påvisning av urinprotein bestemme hvorvidt en pasient har nyresykdommer slik som renal tubulær sykdom eller diabetisk nefropati. I genetiske laboratorier genkloning eksperimenter vanligvis genererer rekombinante (genetisk endrede) proteiner. Analysen av disse syntetiske molekyler er avgjørende i å verifisere gensekvenser eller se etter mutasjoner som kan eller ikke kan være ønskelig. For eksempel vaksiner er proteiner produsert av kunstig modifiserte enheter av gener. Disse proteiner må analyseres omhyggelig for å sikre at gener ble endret på den riktige og ønskede måte, slik at man unngår uønskede side- eller toksiske virkninger.

Protein Expression Analyse av Western blotting

Analysen av proteinekspresjon ved bruk av western-blotting er en meget rutinemessig utført laboratorieprosedyre for for forskere å evaluere genkloning og rekombinant proteinproduksjon. For eksempel, i molekylær biologi og genetisk engineering, har gener fra forskjellige arter (for eksempel mus og menneske) sammenføyd og plassert i en bakteriecelle, som er i stand til å uttrykke proteinet. For å sikre at den riktige proteinet blir generert, må dens ekspresjon bli analysert ved western blotting. Western-blotting er også brukt i medisinsk patologi for å diagnostisere kugalskap og HIV.

Protein Expression Analyse av flowcytometrisystemer

Strømningscytometri krever at cellene å bli farget med et fluoriserende antistoff, som binder seg til et protein som uttrykkes på overflaten av, eller inne i en celle. Den brukes i farmasøytisk forskning for å finne molekyler (cytokiner) som er unike for et bestemt sett av celler og involvert i celle signalisering og kommunikasjon. Dette er viktig, slik at effekten av medikamenter på normal cellefysiologi og funksjon kan overvåkes under legemiddelutvikling og kliniske studier.