Definisjon av parafin innebygging
Mikroskopisk undersøkelse er et middel for å se ting som ikke er synlige for det blotte øye, for eksempel mikroorganismer og celler. For prøver som skal vises ved hjelp av et mikroskop, må de først bli montert på en glassplate. Typer mounts inkluderer tørre mounts, våte mounts og tilberedte mounts. Parafin embedding er en teknikk som brukes for å lage oppkjørte mounts.
Formål
Vise en prøve ved hjelp av et mikroskop krever at prøven være tynn nok til å la lyset passere gjennom den. Mange vev, slik som de fra hjernen, lever og nyrer, er tykk og må skjæres i tynne skiver før den ble undersøkt. Parafin embedding blir brukt til å forberede den vevsprøve slik at den ikke makulere ved slicing. Vevet prøven er fylt med parafin (voks) og plassert inne i en form som mer smeltet parafin er lagt til. Resultatet er et lite kube av voks med parafinfylte vevsprøve innenfor den. Tissue embedding er rutinemessig brukt til å forberede vevsbiopsier for undersøkelse. Vevet embedding prosessen involverer flere trinn, blant annet fiksering, dehydrering, innstøping og snitting.
Fiksering
Når et stykke vev er fjernet fra kroppen, det begynner umiddelbart å dø. Som et resultat av cellene som det er gjort begynner å bli dårligere, noe som gjør nøyaktig mikroskopisk evaluering umulig. Fiksering er en fremgangsmåte for konservering av cellene, og blir oppnådd ved å plassere prøven i et flytende bindemiddel, vanligvis formaldehyd. Fiksativ virker ved å ødelegge kjemikalier ansvarlig for celle sammenbrudd. Den vevsprøve forblir i fiksativ i minst 4 timer.
Dehydrering
Etter fiksering, er det stykke av vevet skylt med vann for å fjerne eventuelle gjenværende fiksativ. Vann og parafin hører ikke sammen. Derfor er alle spor av vann må fjernes fra det skylles vev, en prosess som kalles dehydrering. Dehydratisering blir utført ved å plassere vevspreparat i en serie av alkohol bad av økende styrke. Dehydrering er ikke det samme som tørking. Det er å erstatte vannet med en annen væske som, i motsetning til vann, vil blande seg med parafin. Dehydrering prosessen tar omtrent 15 timer.
Embedding
Straks vevet er dehydrert, er den plassert i ren smeltet parafin for 3 til 4 timer, noe som resulterer i en prøve som har blitt fullstendig infiltrert av voks. Med andre ord, fyller parafin alle kriker og kroker i vevet som pleide å være fylt med vann. Den infiltrerte vev er plassert i en blokkformet støpeform. Smeltet parafin tilsettes til støpeformen, og det er tillatt å avkjøle. Prosessen resulterer i en blokk med voks med et stykke av parafin infiltrert vev innebygd i den. Prøven er nå klar til å bli skiver.
Seksjonering
Seksjonering er betegnelsen som brukes for vev slicing og utføres ved hjelp av et instrument som kalles en mikrotom. Mikrotomen er lik en kjøtt deler, bortsett fra at i stedet for ved hjelp av en frem og tilbake bevegelse, er et sirkulært hjul slått som avanserer parafinblokk når den blir skiver. Sektorene er plassert på glassobjektglass for farging og undersøkelse. Seksjonering krever stor dyktighet. Prøve skivene er så tynne at det er vanskelig å overføre dem til glasset lysbilde uten dem rive, bretter eller folding. En nøyaktig undersøkelse er kun mulig hvis prøven er skikkelig forberedt, forankret og seksjonert.